破解生物大分子吸附困擾：Altura SEC 色譜柱實現低鹽體系優異分離性能背景

鹽濃度是 SEC 方法開發的關鍵變量：低鹽環境難以抑制吸附，高鹽又容易誘發疏水作用，甚至造成蛋白聚集。樣品基質越復雜，越難找到適配廣譜樣品的緩沖鹽條件，給方法開發帶來巨大挑戰。

案例 1：Altura SEC 300?，4.6×300 mm，2.7 μm，我們對比了 4 種不同類型的蛋白分子在不銹鋼和超惰技術柱管的色譜表現。不銹鋼柱管在極低的鹽濃度條件下，4 種不同的樣品顯示出較嚴重的拖尾，甚至根本沒有響應。Altura SEC 超高惰性技術大大減小了樣品和金屬柱管之間的吸附作用，即使在極低的離子強度條件下，峰型也得到很大改善（圖 1）。

圖 2 顯示了 ADC 樣品（戈沙妥珠單抗）的代表性色譜圖，使用 Altura 色譜柱，主峰和聚集體峰之間的分離度為 1.41，而不銹鋼柱為 1.33，表明分離能力有所提高。同時，使用 Altura 超高惰性色譜柱能夠區分二聚體和高聚體，更準確地量化 HMW 聚集，而不銹鋼柱無法區分兩者。

案例 2：Altura SEC 300?，7.8×300 mm，2.7 μm，一些樣品會體現出較強的吸附問題，在分析時需要使用到較高的鹽濃度。如下圖案例二數據中，使用不銹鋼柱管色譜柱時，流動相體系必須達到 400 mM 氯化鈉的鹽濃度時，聚集體峰才能獲得正常洗脫。對比 Altura 超高惰性柱管，流動相體系降低至 200 mM 鹽濃度，即可獲得良好的聚集體峰的回收。這一優勢，可以減小高鹽體系對樣品存在的誘導疏水相互作用的風險。同時，減小了高鹽體系對于色譜柱和液相系統的損傷。

案例 3：Altura SEC 130?，7.8×300 mm，2.7 μm，Altura SEC 柱管的超高惰性特點，還能為分析提供快速平衡。針對存在強吸附的樣品，使用白介素樣品考察色譜柱的重現性。連續 6 針進樣，絕對峰面積和峰面積百分比的 RSD 值分別為 0.78% 和 0.81%，顯示出惰性柱管優異的重現性。實驗證明，針對此類樣品，使用 Altura SEC 超高惰性色譜柱無需提前飽和色譜柱和系統，提高檢測準確度，同時提升分析效率。